Приготовление питательных сред для микробиологии. Полный цикл, все этапы. Часть 1
Vložit
- čas přidán 23. 11. 2019
- Друзья и коллеги!
Тема питательных среды в микробиологи, судя по вашей реакции, многим интересна. Я получал много просьб более подробно рассказать о всех этапах приготовления питательных сред. Конечно, я постарался выполнить вашу просьбу! И снял для вас подробное видео, где демонстрирую полный цикл приготовления.
В первой части вы узнаете:
- какие типы питательных сред бывают по степени готовности к использованию,
- в каких условиях надо готовить среды,
- какое оборудование для этого необходимо,
- что такое пропись питательной среды,
- какие компоненты входят в состав питательных сред,
- как делать навески ингридиентов, смешивать их, разливать, готовить к стерилизации,
- как контролировать уровень рН среды.
Надеюсь, это видео будет для вас полезно, а также я с удовольствием отвечу на ваши вопросы и комментарии!
Еще больше микробиологии - на моём сайте Бакпосев.Ру - bakposev.ru
********
Друзья, если это видео было полезным, в чем-то помогло вам - поддержите наш канал!
money.yandex.ru/to/4100114280...
По этой ссылке вы можете легко сделать перевод на банковскую карту или кошелек Яндекс-Деньги, пожертвования пойдут на развитие канала. Спасибо за ваше участие!
***********
Интересуетесь микробиологией?
Читайте в соцсетсях "Блог микробиолога-практика Романа Овчинникова"!
Фейсбук: blogmicrobiologa
ВКонтакте: blogmicrobiologa
Наш веб-сайт по лабораторной диагностике инфекций:
"Бакпосев.Ру" - bakposev.ru
#микробиологияиинфекции #микробиология #microbiology
Друзья, если это видео было полезным, в чем-то помогло вам - поддержите наш канал!
money.yandex.ru/to/410011428040460
Как вы понимаете, канал «Микробиология и инфекции» полностью некоммерческий, у нас нет спонсоров, и создавался он не для заработка, а просто чтобы поделиться своим опытом и доступно рассказать о своей профессии - микробиологии. Но съемки видео и монтаж занимают у меня довольно много времени, которое можно было бы потратить на деятельность, привносящую реальный доход. Мне конечно будет очень приятно, если вы выразите свою благодарность в форме добровольных пожертвований. Это будет стимулировать меня снимать новые видео и развивать канал «Микробиология и инфекции».
money.yandex.ru/to/410011428040460
По этой ссылке вы можете легко сделать перевод на банковскую карту или кошелек Яндекс-Деньги. Спасибо за ваше участие!
Спасибо! Очень ждем продолжение.
Спасибо за видео!
Рад, что понравилось)
Очень познавательно 👍🏻
Спасибо!)
Спасибо
Подскажите пожалуйста, где брать рецепты сред для микро клонирования растений? Заранее спасибо
Здравствуйте, извиняюсь за свою неграмотность и поэтому обращаюсь к вам за консультацией - можно в домашних условиях приготовить питательную среду для посева семян орхидей, у меня зреет семенная коробочка ?!
Или проще приобрести ингредиенты для п/среды?
Спасибо!
Увы, не знаю состав среды для орхидей) и нужна ли там стерильность..
Спасибо за сегодняшнее видео! Планируете ли Вы классы по методу мембранной фильтрации? Очень хотелось бы увидеть.
Благодарю за отзыв! Вы предлагаете интересную тему, хотя сам я пользуюсь этим методом довольно ограниченно. Но буду иметь ввиду.
@@roman.s.ovchinnikov Спасибо. Вы больше специализируетесь в клинической микробиологии?
@@aigulaigul6837 Да, конечно. Микробиологическая диагностика.
@@aigulaigul6837 Да, именно так.
Тоже хотелось бы про мембранную фильтрацию!)))
Спасибо за видео! Вот кстати для грибов и дрожжей самой универсальной в плане скорости роста считаю YNB без аминокислот, для идентификации по морфологии YNB morphology agar, а для выделения оооочень хорош оказался Rose bengal agar с хлорамфениколом (до трехсот колоний разных видов без прорастания мицелием соседей на чашке в конце 7 дней роста). На Сабуро далеко не все грибы и дрожжи растут, а нокаут-мутантные штаммы и подавно. Для бактерий R2A позволяет выделить по максимуму видов из природных биотопов, включая экстремальные, даже, порой, УМБ.
Спасибо за отзыв и за ваш опыт! Я так чувствую, вы выделяете грибы из внешней среды и из подобных объектов? Не из клинических образцов?
@@roman.s.ovchinnikov Верно, из природных биотопов для фундаментальных исследований структуры или биоразнообразия, с точки зрения биотехнологической значимости. Либо работаю с уже выделенными штаммами из ВКМ.
@@stuurman8179 Класс, очень интересная область! У меня же в основном клиническая микология, патогенные грибы. Но например была работа по микробиому комаров, несколько интересных видов получили. Сейчас делаем пробы из водоемов (Байкал, Ангара).
@@roman.s.ovchinnikov Ну, дрожжи и грибы многие вообще считаются условно-патогенными, те же албиканс, парапсилозис и тропикалис с которыми я работал не проявляли патогенных свойств, в ATCC 4 группа(по-моему). Работа по перестройке клеточной стенки при нефтедеструкции. Но вот если инокулят литрами пить или вмазывать в слизистые- думаю тут все плохо закончится. ЗЫ когда комар кусает, обидно не за укус, а за то, что он, зараза, только-что впрыснул в тебя микробиом слюны и ротового аппарата =)
@@stuurman8179 И кстати дрожжи в микробиоме комара тоже присутствуют). А вы значит тестировали патогенность дрожжей? Каким методом, коллега?
Кстати, пока вы ждёте, что остынет ваша среда на плите может ли она потерять свою стерильность и нахватать бактерий из воздуха? Может лучше её вообще готовить в автоклаве?
Иван, среда на плитке не с целью стерилизации! Это подготовительная операция, чтоб растворить компоненты. А потом ее будем стерилизовать, во второй части видео. А это Часть 1!)
@@roman.s.ovchinnikov а она не успеет затвердеть пока вы будете её стерилизовать?
@@user-qv5kx6el1s , встречайте вторую часть видео! Там мы автоклавируем среду, ДО затвердевания! Но даже если затвердеет, а автоклаве она опять расплавиться.
Подскажите пожалуйста, какая кислотность необходима от 6,5 до 7, при каких значениях надо балансировать PH. Подскажите какая навеска была для Агара (на весах)
Не очень понял первую часть вопроса. Навеска агара была 15 г. Это довольно стандартное количество агара - 15 г на литр, применяется во многих средах.
@@roman.s.ovchinnikov Спасибо, в первой части вопроса имел ввиду какая кислотность должна быть пригодной (какая норма в пределах от 6,5 до 7 ph?, а если выше или ниже уже то тогда нужно балансировать PH в пределя от 6,5-7 ?)
@@jjdf136 Все значения от 6,5 до 7,0 - это норма. Если выше или ниже - надо корректировать.
@@roman.s.ovchinnikov Спасибо понятно.
Большая просьба. Покажите пожалуйста как готовить среду Петровского, Китта Тароцци, ПГГА и ПГГБ
Извините, но это слишком большое задание для меня))
Можно ли применять глюкозу, которая продаётся в таблетках в аптеке?
Не желательно т.к. могут быть примеси, лучше все реактивы использовать с меткой ЧДА или ХЧ
@@Guzal_kamalova Всё верно, для приготовления сред берут лабораторные стандартизованные реагенты. Иначе ее ростовые свойства могут измениться.
И второй вопрос. А кнопки всех приборов применяемых в приготовлении (весы, ноутбук и др.) должны быть стерильными? Если да то чем их можно стерилизовать в домашних условиях?
Приборы стерильными не могут быть в средоварочной, там нет такой необходимости,все приборы должны быть чистыми и в рабочем состоянии( проводить каждое утро калибровку) ,можно поверхности столов и приборов протирать этиловым спиртом 70 % или другими дезинфектантами для обработки поверхностей
Эти приборы не могут и не должны быть стерильными! Ибо готовят среду в нестерильных условиях, а потом стерилизуют (автоклавируют).
Здравствуйте. После просмотра видео возникло пару вопросов. Первый - перед приготовление питательных сред Вы не измеряете рН дистиллированной воды? Просто мы в лаборатории, когда я только пришла, научили всегда измерять рН воды перед приготовлением сред (мы и журнал ведем по этой теме). И второй вопрос - по поводу приготовления сборных сред. Если мы готовим сборные среды (любые - простые или более сложные: ЗПВ, Сабуро, картофельно-глюкозный агар, Китта-Тароцци и другие), то всегда при приготовлении сборных сред ссылаемся на ГОСТ или МУК, в котором прописано, как готовить те или иные сборные среды (и у нас журнал есть, где мы прописываем приготовление сред и по каком документу готовим сборные). И разве приготовление сборной среды в лаборатории по банке одного из производителей не является нарушением авторских прав производителя? И такой еще вопрос: в университете и на работе уже мня всегда учили, что глюкозу лучше добавлять в холодную или максимум еле теплю воду. Или допускаются еще варианты?
Конструктивные вопросы. рН вижу смысл измерять уже в смеси. По поводу инструкции на банке и авторских прав не вижу связи. Изготовитель специально для нас пишет эту инструкцию. Про добавление глюкозы возможно вы и правы. Но почему так рекомендуют, вам не сказали?
@@roman.s.ovchinnikov 1.По поводу рН воды. У нас аквадистилляторы проходятплановую поверку, чистку регулярно и рН воды мы измеряем для того, чтобы проверить текущую работу (если можно так выразиться) дистиллятора. И тем более есть ГОСТ по воде - 6709-72, где написано, что рН воды должно быть от 5 до 7 и если результат не в этих границах, то проводятся корректирующие действия - внеплановая проверка дистиллятора. Ведь питательные среды - основа всего, от них зависит ход исследования и важен каждый момент. А среды делаются из дистиллированной воды, поэтому мы и ее проверяем и журнал ведём.
2.По поводу авторских прав. Я работаю в отделе приготовления питательных сред и у нас есть журнал, где мы прописываем когда, сколько и что мы приготовили (по заявкам на среды от других специалистов, которые работают в заразной зоне). И когда возникает вопрос о сборных средах, то коллеги всегда приносят рецепт из МУКа или ГОСТа, с которым работают (например, ГОСТ на исследование молочной продукции, им оттуда нужна сборная среда - любая, они распечатывают рецепт на нужную среду по установленной у нас форме и приносят) и мы в журнале прописываем откуда взяли рецепт (номер ГОСТа или МУКа). Просто, когда я пришла, мне рассказывали историю, что как то приготовили среду сборную по рецепту по банке от производителя, в журнале не прописали откуда рецепт, потом комиссия пришла, были разбирательства по этому поводу долготе. Вопрос был в том, что производитель выдержал свою методику приготовления среды, все сам посчитал, выдал паспорт соответствия (качества), а мы просто "переписали" все это, хотя права не имели. И как сказала комиссия: для сборных сред есть нормативные документы, которыми имеют право пользоваться все и ссылаться тоже. А производителей много, у каждого своя технология производства. Приведу пример по поводу срока хранения сред. Например, среда эндо. От ФБУН г. Оболенск готовая среда используется в день приготовления, а от ООО Биотехновация 5 дней, то есть два разных производителя, две разные методики производства, а мы просто взяли и переписали состав, приготовили, не зная всей сути.
3.По поводу глюкозы. Самой интересен этот момент. Пыталась найти информацию сама. Но как мне объясняли, что нельзя растворять глюкозу в горячей воде, потому что это повлияет на качество среды в худшую сторону и ход исследования будет неверным (скорее, результаты будут недостоверными)
@@roman.s.ovchinnikov И ещё хочу немного дополнить. Некоторые среды мы готовим в термостойких колбах с ватно-марлевыми крышками, завернутыми в бумагу, так как некоторые среды не автоклавируется, например,селенитовый бульон. Мы в колбе его приготовили и над спиртовкой в ламинаре его различаем.
@@user-zm2qm5ih3j да, в приготовлении сред много нюансов. В этом видео я говорю о базовых вещах.
@@user-zm2qm5ih3j спасибо за подробный комментарий. Вы явно работаете в испытательной лаборатории, поэтому у вас всё так дотошно. В других лабораториях в основном делают среды по инструкциям производителя без дополнительных заморочек
А можно просто сделать на дистиллированной воде и желатине питательную среду?
Можно сделать желатиновую среду. Но на ней мало кто сможет расти. Не все микробы способны гидролизовать желатин как единственный источник белка.
Желатин "плывёт" при нужных для роста температурах.
Какие кислоты и щелочи (каких металлов) можно применять для регулировки рН?
Используют соляную кислоту для понижения рН,а для поднятия едкий натрий 0,1 М
Все верно ответила Гузаль - HCl и NaOH определенных концентраций.
@@roman.s.ovchinnikov кальций (мел) допустимо использовать для регуляции PH ?
@@maxon9832 Не надо самодеятельности при приготовлении питательных сред, я считаю.
@@maxon9832
Среда 10. Для выделения культур Clostridium, (г/л): КН2РО4 - 0,5, К2НРО4 - 0,5, MgS04 - 0,5, NaCl - 0,5, вода водопроводная, глюкоза - 20, пептон - 5, CaCO3 - 10, рН - 7,0.
studfile.net/preview/5244850/page:17/
===
Мел вешанке добавляют.
Подскажите, можно ли в домашних условиях приготовить среду для Bacillus turingensis?
Как конкретно называется среда? Какая пропись?
@@roman.s.ovchinnikov ух, я и не думал что дождусь ответа. Попозже найду патент, и там есть описание на каких средах делали. Скину ссылку.
@@roman.s.ovchinnikov Добрый день. Вот здесь есть описание на каких средах делали и где лучше результат edrid.ru/rid/216.013.6d56.html И у меня вопрос: каким простым путём можно приготовить пит.среду(в жидком виде) и размножить эту бактерию?
Помогите пожалуйста.
@@Minivan4444 При всем уважении у меня нет возможности это всё прочитать. Пришлите конкретную пропись. При приготовлении любой среды главное - ее грамотно простерилизовать.
@@roman.s.ovchinnikov ок, перепишу все среды на которых проводили испытания. Но одну среду помню: мясопептонная.
Здравствуйте расскажите какой лучше автоклав купить домой для стерелизации сред
Домой никакой автоклав покупать не советую. Это прибор повышенной опасности.
@@roman.s.ovchinnikov я уже купил на 26 литров для заготовки банок с тушенкой
его качество сборки и сварные швы оставляют желать лучшего(
@@Dimgames Видимо бытовой, типа скороварки? Я говорил про профессиональные аппараты, их домой лучше не надо)
@@Dimgames это плохо. Высокое давление - не шутки.
А сколько агар-агар? На половину объема взяли?
Нет. Количество агара берется по прописи конкретной среды. В данном случае 15 г на 1 л.
Здравствуйте, подскажите, пожалуйста, можно ли заменить агар-агар в среде на какой-то минеральный уплотнитель, кроме силикагеля. Конкретно Мурасиге-Скуга интересует, но можно и варианты в других средах🙏
Обычно применяют агар, хороших аналогов я не могу назвать. Есть желатиновые среды, но это другое.
Нет.
Посмотрите среды лидеров мирового рынка, уж у них-то есть все возможности, но используют агар-агар.
(Желатиновая среда это отдельный тест, в качестве основы не пойдёт)
Можно ли применять кипячёную воду вместо дистиллята?
Если есть дистиллированная вода,то используйте ее. Кипяченая вода не желательна,т.к. она не достаточна чистая(в смысле минералы не все в осадок выпадают)
Как уже говорилось, вода из-под крана, пускай и кипяченая, будет влиять на минеральный состав среды.
а грамм сколько агар агара вы добавили? и что за кислоты и щелочи лучше применять?
В большинство сред добавляется 10-15 грамм агара
@@roman.s.ovchinnikov спасибо👍
а эта среда вообще на сколько универсальна? многие ли бактерии в ней прорастут? я слышал что её широко применяют для грибков
Среда довольно универсальна,хотя она ориентирована на рост грибов,на ней многие бактерии также неплохо растут,если добавить хлорамфеникол - рост бактерий будут подавляться . Тогда на этой среде будут расти только грибы.
И опять Гузаль за меня всё верно ответила. Сабуро предназначена для грибов, но могут вырасти и бактерии. Обычно ее используют с добавлением хлорамфеникола, чтоб росли только грибы. Она широко используется для микологических анализов.
Мы на ней выращиваем дрожжи, плесень и грибы
Получается для набора каждого компонента нужна новая ложка?
Да, конечно. Чтобы не загрязнять компоненты в банках.
Вопрос,флаконы для розлива питательных сред предварительно нужно стерилизовать автоклавированием или можно упустить этот момент??
Пустые флаконы до разливки стерилизовать не надо! Всё и так простерилизуется при автоклавировании среды.
@@roman.s.ovchinnikov спасибо))
@@roman.s.ovchinnikov работала в семи лабораториях и нигде не использовали для сред нестерильную посуду, кроме особо оговоренных в прописях случаев.
@@zaibusinka Перед автоклавированием разливали среды в стерильную посуду? Смысл? Основания какие? Двойная работа.
@@roman.s.ovchinnikov по моим гостам и му стерилизация посуды 30 минут 121°C, стерилизация сред 12-15 минут 121°C. Т.е. при автоклавировании сред условия стерилизации посуды не выполняются
А зачем воду разогревать, вы же потом всё равно стерилизовать в автоклаве будете? Там потом прекрасно всё растворится под температурой, главное - перемешать тщательно. Получается, только для замера pH? А не происходит ли изменения после автокоавирования? Какая-то часть воды ведь всё равно испаряется и оседает на крышке/в фольге, это влияет на концентрацию и, соответственно, на pH. Или нет?
Воду разогревают по двум причинам. 1. В инструкции написано - прогреть до кипения для полного растворения. Значит надо прогревать. 2. Если этого не делать, несмотря на автоклавирование среда не будет однородной. В застывшем флаконе будут видны слои, это личный опыт. В итоге, надо прогревать. рН действительно надо измерять после автоклавирования то же.
А что использовать вместо пептона ?Подскажите пожалуйста!
Если в рецепте среды написано пептон - значит надо использовать только пептон. В основном пептон мясной, из казеина молока, но бывает и рыбный. Есть растительный аналог пептона, из соевого белка.
@@roman.s.ovchinnikov а можно пептон сделать в ручную из мяса,и с минимальными затратами?
@@roman.s.ovchinnikov а то в моем городке пептона нет,а доставка по почте дело сомнительное!
@@Alex-cs2ws Некоторые среды готовят на мясном бульоне, там надо просто сварить мясо. Можете поискать подробнее информацию в инете, типа "мясной агар"
@@Alex-cs2ws Пептон сухой, хранится долго, при пересылке по почте ничего с ним не случится (скорее всего)
Что добавляют в агар , что бы на нем не росли грибы а росли только бактерии ?
Обычно в бактериальные среды не добавляют ничего, подавляющего грибы. Потому что бактерии растут гораздо быстрее бактерий, им грибы особо не страшны. А вот в грибные среды добавляют антибактериальные компоненты, хлорамфеникол например.
@@roman.s.ovchinnikov Благодарю . Можно у бактерий выработать резистентность искусственно , добавив в чашку петри несколько кусочков антибиотиков ?
Нужно было на лаборанта идти , люблю я эти все дела .
@@SERGEYFT думаю, в принципе это возможно. Но я такими опытами не занимался.
Разве не лучше варить среду в стеклянной колбе из термостойкого стекла там хорошо видно есть ли осадок, растворились все частицы или нет
У вас есть личный опыт применения таких колб? Если вы уверены, что они имеют преимущества, то благодарю вас за эту ремарку.
Растворимость видна в любой посуде - после минут трёх несильного кипения раствор становится прозрачным и прекрасно видно что осталось нерастворенным или пригоревшим.
По своему опыту могу сказать, что нерастворяются только изначально не размешанные комочки при очень быстром нагреве.
@@zaibusinka кастрюля это не лабораторная посуда
@@Elena_ua в богатой лаборатории работаете, раз не приходится ничего изобретать )))
Музыка фоном мешает
Услышал вас
Это все не для обывателя , нам нужны колхозные методы 😅, сейчас даже глюкоза по рецепту не говоря уже про антибиотики
Мой канал в основном для микробиологов. Действительно, не для обывателей)
Хорошо видно, что это микробиолог а не химик;) химик никогда в жизни не всыпал бы остатки порошка из мерной ложки ОБРАТНО в банку с чистым веществом;)) 10 раз так всыплешь и прости прощай чистота для анализа. А то и 1 раза хватит.
Ок, услышал)) А если мы каждый раз будем высыпать в мусор остатки, никаких сред и реагентов не напасешься)